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人百日咳丝状血凝素（FHA）IgG抗体检测试剂盒
1. 预期用途
本试剂盒用于检测血清、血浆中的百日咳丝状血凝素（FHA）IgG抗体，仅供研究使用，不得用于诊断。
2. 检测原理
试剂盒采用间接法原理：将百日咳丝状血凝素（FHA）抗原包被于酶标板上，加入样品，样品中的IgG抗体被捕获，结合形成“抗原-IgG抗体”免疫复合物，清洗去除游离的杂质，再加入HRP标记的酶标二抗，形成“抗原-IgG抗体-酶标二抗”夹心复合物，清洗去除多余的酶标抗原，加入TMB显色，再加入终止液，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测抗体的浓度呈正比。
3. 包含的实验材料实验材料
| 名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量（48T） Quantity | 数量（96T） Quantity |
| 酶标板 | 包被板 | 8×6条 | 8×12条 |
| 阳性对照 | 阳性对照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
| 阴性对照 | 阴性对照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
| 酶标二抗 | HRP酶标记抗人IgG | 1支×5mL | 1支×10mL |
| 样品稀释液 | PBS、BSA等 | 1支×5mL | 1支×10mL |
| 浓缩洗液（20×） | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
| 显色剂 | 过氧化氢、TMB | 1支×6mL | 1支×10mL |
| 终止液 | 稀硫酸、抗沉淀剂 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
4. 需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存；
· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存，每次实验仅准备所需实验用量的试剂；
· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。配制好的洗液可以在室温保存1周；
6. 样品采集、预处理及储存
下面列出的样品收集和储存条件旨在作为一般性指导，不同类型样品的储存、使用稳定性尚未完全评估。
· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血清样品冻融不超过2次。
· 血浆：使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血浆样品冻融不超过2次。
· 不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血样品。
· 样品应无微生物污染。
7. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
| 1 | 合理安排阳性对照孔、阴性对照孔、空白孔、样品孔。 |
| 2 | 阳性对照孔加入阳性对照100uL，阴性对照孔加入阴性对照100uL。阴阳对照各设置3孔。 |
| 3 | 样本孔先加入样品稀释液80uL，再加入样本20uL。 空白孔不加样品不加酶，其余操作与样品孔相同。 |
| 4 | 盖上封板膜，在37℃下孵育30分钟。 |
| 5 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 6 | 每孔加入预先配制好的酶标抗体工作液100μL。 |
| 7 | 盖上封板膜，在37℃下孵育30分钟。 |
| 8 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 9 | 每孔加入显色剂100uL |
| 10 | 37℃下避光孵育15**分钟。 |
| 11 | 每孔加入终止液50μL。 |
| 12 | 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值，如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。 |
8. 阳性判断值Cut-Off
Cut-Off =阴性对照孔平均OD值×2.1（阴性对照孔OD均值小于0.050时，按0.050计算）。
例：阴性对照孔平均OD值为0.100，则Cut-OFF值=0.100×2.1=0.210；
阴性对照孔平均OD值为0.020，则Cut-OFF值=0.050×2.1=0.105。
9. 结果判断
阳性结果：样本OD值＞Cut-OFF值，结果判为阳性；
阴性结果：样本OD值≤Cut-OFF值，结果判为阴性；
10. 检测的局限性
样本浓度低于检出限时，检测结果无法进行准确判断。本试剂为定性试剂，不能作为定量试剂使用。
11. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
检测3份企业阳性参考品，结果均为阳性。检测3份企业阴性参考品，结果均为阴性。
精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。
12. 注意事项
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！
· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。
