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测定意义:
NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。
测定原理:
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH;NADPH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT),通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
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