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检测意义:
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
检测原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。
检测仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
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